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還原型(GSH)樣本的前處理
點擊次數:1578 更新時間:2021-07-07

還原型(GSH)樣本的前處理:

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

① 準確稱取0.g組織或收集500萬細胞,加入mL試劑一和0uL試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

② 將勻漿 600g,4℃離心5min。

③ 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,00g,4℃離心0min。

④ 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測定從線粒體泄漏的 NOX(此步可選做)。

⑤ 步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔0秒,重復30次),用于NOX活性測定。

血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至600nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定

()試劑四于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min。

(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入0μL樣本、200μL試劑四和40μL試劑五,混勻,記錄600nm處20s時吸光值A和min20s后的吸光值A2,計算ΔA=A-A2。

NOX 活力單位的計算

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

、血清(漿)NOX活力的計算:

單位的定義:每mL血清(漿)在每mL反應體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個酶活力單位。

NOX(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.0÷T=2500×ΔA

2、組織、細菌或細胞中NOX活力的計算:

()按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A600變

Bis-Acrylamide 25g/00g Amresco 072
(甲叉雙丙烯酰銨)
BisBenzimideHoechstNo.33258 25mg/00mg/500mg Sigma B-2883
(熒光染料)
BisBenzimideHoechstNo.33342 25mg/00mg/500mg Sigma B226
(熒光染料)
Bis-Tris 25g/00g/kg原裝 Amresco 075
Bis-TrisPropane 5g/25g/500g原裝 Sigma B6755
Bluo-Gal 00mg原裝/g原裝 INALCO758-0750
(5-Bromo-3-Indolyl-β-D-
Galactopyranoside)
BM-Cyclin 37.5mg原裝 Roche 799050
(支原體抑制劑)
Boricacid 250g/500g/kg Amresco 0588
(硼酸)
BrainHeartInfusion 00g原裝/500g原裝 BD
(腦心浸液
(無瓊脂))
BrainHeartInfusionAgar 00g原裝 BD 2065
(腦心浸液瓊脂)
BrainHeartInfusionAgar 500g原裝 BD 24820
(腦心浸液瓊脂)
BrainInfusionPower kg 國產
(腦浸粉)

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